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《美國藥典》主要內容

《中國藥典》主要內容

簡介

背景介紹

簡介

背景知識：熱原與內毒素

1）“細菌內毒素”或“內毒素”是指革蘭陰性細菌（GNB ）外細胞膜的復雜成分，是具有生物活性的脂多糖（lipopolysaccharide,  LPS），包括各種蛋白質、磷脂和脂蛋白。

2）內毒素可能會在GNB 死亡后在細胞壁片段中保持活性，因此供試品可能是無菌的，但仍可能檢測出內毒素。

3）RSE：參考標準品（Endotoxin  Reference Standard, 中國國家標準品）；CSE：對照標準內毒素（Control standard Endotoxin, 中國稱為工作標準品）；通過Westphal 熱酚法從GNB 細胞膜中提取出來；

4）需要驗證相關內容：測定限值；最大有效稀釋倍數（MVD。）

無

預備性試驗

1）工作標準品標定：使用RSE對CSE的校準、使用凝膠法確定CSE效價、使用定量的動態法和終點法確定CSE效價、液體CSE的活性測定；

2）質量管理：試驗人員資質、設備和儀器的校準與檢定、實驗室環境條件

1）無（我國RSE和CSE由國務院藥品監督管理部門依法設立的藥品驗機構生產并組織協作標定賦值；美國RSE由FDA生產并組織協作標定給賦值，CSE由鱟試劑生產廠家生產并根據RSE標定CSE。）

方法適用性

限度的計算：注射用藥品、眼部用產品、復合無菌制劑、活性底物和賦形劑、藥械組合產品以及醫療器械等

只對注射用藥品的限值確定做了相關要求，但對于多種規格的注射劑以及原料藥制定內毒素限值的制定方面給予了明確指導。（對應1.細菌內毒素限值的確定）

MVD：當產品在MVD 顯示陽性時，表明其不符合內毒素限量要求，在這種情況下，可以使用超過MVD 的稀釋倍數來進行檢驗。并建議實驗室可通過稀釋至陰性（凝膠法）或到達標準曲線上的有效讀數（定量法）的方式來確定產品中細菌內毒素的總含量。

在凝膠法檢驗時，如果計算出的MVD值不是整數，可以使用小于MVD的整數進行實驗。當出現陽性結果時，為判斷產品是否合格，需采用計算的MVD重新測試。（對應5.其他（MVD 部分））

干擾的排除：比較詳細地介紹了一些常見的干擾因素產生的原因和排除的方法。

重點介紹了目前細菌內毒素檢測的一些難題，如微球脂質體等采用包合技術制備的特殊樣品，以及難溶性的注射用原料藥和輔料，應采取特殊的前處理將微球和脂質體以及難溶性樣品被包裹的內毒素釋放出來，再進行檢測，并且針對不同類型的樣品給予了不同的建議（對應3.供試品的前處理方法）

日常檢測

采樣：對取樣所有材料（勺子，移液管，瓶）的質地要求，采用必須采取的預防措施，生產中循環水系統中如何取樣，粉狀和顆粒狀固體尤其是對于高黏度材料如何取樣和應注意的問題等。

無

合并：允許合并檢測

無

OOS和重新試驗：系統適應性參數未按預期發揮作用的試驗被稱為無效試驗，真正的OOS結果僅在執行了有效的測定并產生超出規格的結果時存在。對OOS 調查的內容進行了描述。

無

標準曲線控制：對光度測定法中的線性要求是| r |≥0.980。并要求用三個有效數字表示，最后一個“0”很重要；在一個控制良好的實驗室中，相關系數通常大于0.980。所有標準曲線都有一個對應的線性方程y = mx+b，其中m是標準曲線回歸線的斜率，b是y軸截距。

無操作細節，但是要求方面與《美國藥典》一致。

替代方法

法定方法：凝膠限度法、凝膠半定量法、動態顯色法、終點顯色法、動態濁度法、終點濁度法；

替代方法的要求：必須充分驗證用于檢測細菌內毒素的替代方法，以確保使用的替代方法等同于或優于現有的內毒素檢查法，并最終由相應的監管機構批準；

與《美國藥典》一致（對應2.方法的選擇及5.其他（替代方法部分））

詞匯表和參考文獻

詞匯表和參考文獻

無

產品內毒素檢查法的建立

無

《中國藥典》規定為了驗證樣品和不同廠家鱟試劑反應的一致性：應使用兩個生產廠家的鱟試劑對至少3 批樣品進行干擾試驗。并且明確建議了不宜建立細菌內毒素檢查項的情況：無法排除供試品對細菌內毒素檢查的干擾作用或只能使用最高靈敏度鱟試劑（凝膠法0.03 EU·mL-1，光度法0.001  EU·mL-1）。（對應4.產品內毒素檢查法的建立）

總結

《美國藥典》在生產過程中、實驗細節、質量管理給予了較多指導

《中國藥典》在方法的選擇、供試品的前處理方法、產品細菌內毒素檢查法建立給予了較多指導