前期無菌準備工作：

⑴提早一個鐘頭左右時間開啟微生物實驗室紫外燈進行消毒滅菌處理

⑵工作人員的衣物和手，做好清潔衛生和消毒殺菌；

⑶把用來微生物培養基所需容器與接種的器具和中海培養基等做好滅菌處理；

⑷全部的無菌操作都需在酒精燈旁進行操作。

中海培養基配制：

⑴LB肉湯：肉湯粉三百三十克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升；

⑵營養瓊脂培養基：瓊脂培養基粉三百克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升。

倒平板步驟操作流程：

⑴培養皿經過滅菌處理后擺放在火苗旁的桌面上，右手拿配有中海培養基的錐形瓶，左手拿掉棉塞，右手拿錐形瓶，使瓶口快速進行火苗；

⑵中海生物技術人員的左手把培養皿開啟一條稍超過瓶口的間隙，右手將錐形瓶中的十至二十毫升中'海培養基倒進培養皿，左手馬上蓋好培養皿的皿蓋后慢慢混合均勻。

⑶大約等差不多五至十分鐘平板冷卻凝固后，把平板倒過來擺放，使皿底在上，皿蓋在下。

平板劃線流程操作：

⑴將接種環放置在火苗上灼燒，一直到接種環燒紅；

⑵在火苗旁冷卻后接種環，并開啟內盛菌液的試管的棉塞；

⑶將試管口經過火苗。中海生物jyqhe.com培養基廠家

⑷將已冷卻后的接種環伸入菌液中，沾取一環菌液；

⑸將試管口經過火苗，并塞上棉塞；

⑹左手將皿蓋開啟一個間隙，右手將沾有菌種的接種環快速滲入平板內，劃三至五條平行線，蓋緊皿蓋。要注意不能刮破培養基。

⑺灼燒接種環待其冷卻后，從第一區域劃線的尾端逐漸往第二區域內劃線。多次重復上述操作流程，在三區域內劃線。留意不能將最后一區域的劃線與第一區連在一起。

⑻將平板倒放，放進培養箱中培養。

進行稀釋操作流程：

⑴將各自內盛九毫升水的六支試管滅菌處理，并按10^6的順序編號。

⑵用移液管抽取1毫升培養的菌液，灌入十倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水完全混合均勻。

⑶從十倍稀釋的試管中抽取一毫升稀釋液，灌入一百零二倍稀釋的試管中，多次重復第2步的混合均勻進行操作。依次類推直達成功完成最后一個試管的稀釋。注：移液管必須進行滅菌處理。進行操作時，試管口和移液管應在離火苗的一至二厘米處。

涂布平板操作流程：

⑴將涂布器浸在內盛酒精的燒杯中；

⑵取不超過0.1毫升少許菌液，滴加到中.海培養基外表面；

⑶將沾有少許酒精的涂布器在火苗上點燃，待酒精燒盡后，冷卻后八至十秒；

⑷用涂布器將菌液均衡地涂布在培養基外表。涂布時可旋轉培養皿，使涂布均衡。

需要注意事項：

⑴將涂布器尾端浸在內盛70%濃度酒精的燒杯中。取出來時要讓多出的酒精在燒杯中滴盡，接著將沾有少許酒精的涂布器在火苗上燃燒。

⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能將溫度過高的涂布器放置在存放酒精的燒杯中，防止燃燒其中的酒精。

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