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    大腸桿菌O抗原定型血清說明書(固體)-中海生物

    日期:2023-12-26 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:765 次

    系用大腸桿菌菌株滅活抗原接種健康兔,采血,分離血清,標化,經冷凍干燥制成凍干血清。

    【性狀】本品為白色、淡黃色或淡紅色疏松團塊。

    【作用與用途】用于大腸桿菌O抗原血清型鑒定。

    【用法與判定】

    1.血清的稀釋

    多價血清的配制:將多種大腸桿菌O抗原定型血清分別用0.5%石炭酸生理鹽水恢復原量(1mL)后混合,裝入青瓶,蓋緊。

    單因子血清的配制:將一種大腸桿菌O抗原定型血清溶解于5mL 0.5%石炭酸生理鹽水(視為15稀釋),裝入小瓶,蓋緊。

    2.抗原的制備

    平板凝集抗原制備:將被檢菌株劃線接種于麥康凱瓊脂平板,置37℃培養24小時。在麥康凱瓊脂平板上挑選光滑圓整菌落,接種普通瓊脂斜面,37℃培養24小時。用1.52.0mL石炭酸生理鹽水將普通瓊脂斜面培養物全部洗下,收集于一小試管中,于121℃高壓2小時,破壞其“K”抗原。

    試管凝集抗原制備:將被檢菌株劃線接種于麥康凱瓊脂平板,置37℃培養24小時。在麥康凱瓊脂平板上挑選光滑圓整菌落,接種普通瓊脂斜面,37℃培養24小時。取普通瓊脂斜面培養物接種普通肉湯培養基(100mL),置37℃振蕩培養815小時。培養物于121℃高壓2小時,破壞其“K”抗原。

    3.平板凝集反應

    抗原先與大腸桿菌O抗原多價定型血清進行平板凝集反應,然后再與大腸桿菌O抗原定型血清進行平板凝集反應。即抗原和血清各取50uL于玻璃板上混勻,涂成直徑約2cm的圓膜,1分鐘中內出現明顯凝集顆粒判定為“陽性”。同時以抗原與0.5%石炭酸生理鹽水混合物作對照,觀察有無自凝集現象。

    4.試管凝集反應  

    1排小圓底試管中先加稀釋液0.5%石炭酸生理鹽水,第1管加1.5mL,從第2管起各管加0.5mL,然后在第1管加入大腸桿菌O抗原定型血清(1:5)0.5mL,混勻后,從第1管吸取0.5mL,加入到第2,依次作1:20、1:40、1:80、1:1601:320……1:10240系列稀釋,然后各管加抗原0.5mL,振蕩使血清和抗原充分混勻,放入37℃溫箱1820小時,取出后在室溫靜置2小時,記錄每管的反應情況。如凝集價高于或等于1640(第5管)即可判定為“陽性”。每個試驗均應設有被檢抗原+0.5%石炭酸生理鹽水對照。

      結果判定:

       “#”  ——液體完全透明,管底覆蓋明顯的傘狀凝集沉淀物。

       “+++”——液體略呈混濁,管底傘狀凝集沉淀物明顯。

       “++” ——液體呈中等程度混濁,管底有中等量傘狀凝集沉淀物。

       “+”  ——液體不透明或透明度不明顯,有不顯著的傘狀凝集沉淀物。

     “-”  ——液體混濁,無任何凝集沉淀物,細菌可能沉于管底,呈光滑圓盤狀,振蕩時呈均勻混濁。

    最終結果判定:以++”作為被檢抗原的效價終點。

     【規格】1ml/

    【貯藏與有效期】溶解后的血清在28℃保存,有效期為12個月。


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