ELISA實驗過程中遇到的四大類問題和處理辦法
日期:2021-09-24 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1005 次
㈠ELISA試驗檢測存在比較弱的結(jié)論,中海生物認(rèn)為大致存在七種影響因素及其處理辦法:
問題⑴:溫育的時長以及環(huán)境溫度不足;
處理辦法:校準(zhǔn)溫育箱環(huán)境溫度。
問題⑵:顯色反應(yīng)時長實在太短暫;
處理辦法:校準(zhǔn)電子定時器精確指定時間。
問題⑶:常用制備緩沖液的蒸餾水出現(xiàn)問題;
處理辦法:采用新鮮的符合標(biāo)準(zhǔn)的蒸餾水。
問題⑷:添加抗體/酶的稀釋液溶液濃度太低;
處理辦法:遵循使用中'海說明書介紹貯存試劑盒和精確制備工作液。校準(zhǔn)移液器,吸嘴要匹配,裝吸嘴時要緊密。
問題⑸:酶標(biāo)儀濾色片不符合規(guī)定的;
處理辦法:常規(guī)檢查酶標(biāo)儀采用的濾色片。
問題⑹:ELISA試劑盒沒能有效充分的穩(wěn)定平衡;
處理辦法:ELISA實驗試劑在常溫穩(wěn)定平衡不低于二十分鐘左右,切實保障全部實驗試劑已穩(wěn)定平衡至在常溫。
問題⑺:不符合規(guī)定的的實驗試劑貯存方式辦法;
處理辦法:遵循使用說明書介紹規(guī)范要求貯存試劑盒。
㈡試驗檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定辦法的重復(fù)性差,那究竟是怎么回事造成的?
它主要是由測定辦法實際操作造成的問題現(xiàn)象,主要根本因素如下所示:
問題⑴:加樣本及實驗試劑量不準(zhǔn)確;板孔不一致;
處理辦法:校準(zhǔn)移液器,吸嘴要匹配,裝吸嘴時要嚴(yán)密。反復(fù)某一產(chǎn)品的樣品時,加樣時長盡量避免與首次貼近;反復(fù)檢測生物標(biāo)本,技術(shù)人員操作辦法維持不變,減少出現(xiàn)結(jié)果不同的幾率原因;產(chǎn)品的樣品稀釋前須有效充分的混合均勻。
問題⑵:加樣過快,板孔產(chǎn)生污染源;
處理辦法:反復(fù)測定辦法生物標(biāo)本,實際操作前提條件是中海生物技術(shù)人員等應(yīng)盡量避免與之前維持不變,以解決這類因素帶來的不一致的概率;注意加樣千萬別過快。
問題⑶:錯加樣本;
處理辦法:檢查記錄和實驗試劑,有沒有錯加樣本。
問題⑷:加樣本及實驗試劑時,放在孔壁上部非包被區(qū);
處理辦法:加樣槍嘴千萬別貼容器壁。
問題⑸:不一樣生產(chǎn)批號試劑盒中成分混合使用;
處理辦法:不一樣生產(chǎn)批號試劑盒中成分不能夠混合使用。
問題⑹:溫育時長、洗板、顯色時長不一致;
處理辦法:中.海常規(guī)檢查時長有沒有相同。
問題⑺:孔內(nèi)污染源雜質(zhì);
處理辦法:離心產(chǎn)品的樣品,解決雜質(zhì)。
問題⑻:實驗試劑/產(chǎn)品的樣品沒能混合均勻;
處理辦法:有效充分的混合均勻產(chǎn)品的樣品和實驗試劑。
問題⑼:血清生物標(biāo)本未充分凝結(jié)即添加,反應(yīng)孔內(nèi)存在纖維蛋白凝結(jié)或存留血細(xì)胞,易存在假陽性反應(yīng)等。
處理辦法:待血清生物標(biāo)本充分凝結(jié)后做試驗檢測。
㈢試驗檢測結(jié)論白板,同時陽性對照不顯色,應(yīng)怎樣研究和搜索根本原因?
試驗檢測結(jié)果顯示白板,同時陽性對照不顯色,普遍根本原因如下所示:
問題⑴:漏加或是誤加實驗試劑;
處理辦法:常規(guī)檢查試驗檢測記載和余下的實驗試劑。次次加液前均應(yīng)核查標(biāo)簽貼。
問題⑵:實驗試劑逾期;
處理辦法:采用有效期限內(nèi)的中海產(chǎn)品。
問題⑶:發(fā)現(xiàn)洗板液制備中如容量瓶不干凈含HRP酶抑制物等情況;
處理辦法:中海生物技術(shù)采用干凈整潔的容器,科學(xué)合理制備實驗試劑。
問題⑷:溫育的時長或環(huán)境溫度不足;
處理辦法:校準(zhǔn)溫育箱環(huán)境溫度。
問題⑸:標(biāo)準(zhǔn)品失活或是丟失;
處理辦法:標(biāo)準(zhǔn)品科學(xué)合理儲存、充分均勻溶解和混勻。
問題⑹:抗體失活或是丟失;
處理辦法:替換抗體或是提升抗體濃度值
問題⑺:酶失活或是丟失
常規(guī)檢查手段:把正常濃度值的酶再進行稀釋二十至一百倍,取五微升添加五十微升的顯色底物,結(jié)束后顯色有沒有能到達(dá)壹上下,可做為酶的大概估測。
處理辦法:替換酶或是提升酶的濃度值。
問題⑻:顯色底物失活
常規(guī)檢查手段:加一定量的工作濃度值的酶,TMB有沒有快速顯色。
解決辦法:替換顯色底物.
㈣試驗檢測結(jié)果顯示空白背景高,其普遍根本原因如下所示:
問題⑴:洗板不干凈;
處理辦法:充分的清洗,完全拍干;洗板要杜絕交叉式造成污染;濃縮洗液準(zhǔn)確無誤制備;吸嘴最好使用一次;加樣和加酶拍板的濾紙應(yīng)丟掉不用,更不要多次采用,不然易產(chǎn)生造成污染。
問題⑵:顯色液發(fā)生變質(zhì)或是實驗試劑逾期;
處理辦法:常規(guī)檢查試劑盒有效期限。
問題⑶:實驗試劑進行稀釋不正確,如加酶的濃度值過高;
處理辦法:請按照中 海使用說明書所述的稀釋倍數(shù)制備;
問題⑷:蒸溜水受酶等造成污染;
處理辦法:中海生物采用新鮮的蒸溜水;
問題⑸:實驗試劑混合使用;
處理辦法:不一樣生產(chǎn)批號實驗試劑勿混合使用。
問題⑹:恒溫培養(yǎng)箱環(huán)境溫度高于三十七攝氏度或持續(xù)時間太久。
處理辦法:顯色反應(yīng)時長盡可能減少。
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