一、菌種斜面低溫保藏儲存方法  

 1、將細菌接種在合適的固態斜面培養基上。細菌充分生長后，用油紙包裹棉塞，將其移至二至八攝氏度的冰箱中進行保存。  

 2、中海微生物霉菌，放線菌和帶有孢子的細菌要保存二到四個月，然后移植一次。 酵母菌有兩個月大，最好每個月移植一次細菌。  

此方法是實驗室和工廠菌株房中常用的保存方法。它具有操作簡單，使用方便，不需要專用設備的優點，中'海并且可以隨時檢查保存的菌株是否死亡，變異和污染。缺點是易于突變，因為培養基物理和化學性質不是嚴格恒定的。重復傳代會改變微生物的新陳代謝，從而影響微生物的特性；有更多機會污染細菌。

二、菌種濾紙保藏儲存方法

 1、將濾紙裁切成0.5*1.2厘米規格的小條，放入一兩張0.6*8厘米的安瓿管中，塞滿1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下滅菌三十分鐘。  

 2、培養需要保存在合適的傾斜培養基上以使其完全生長的菌株。   

 3、取1-2ml無菌脫脂牛奶并將其放入無菌陪替氏培養皿或試管中，然后將其與牛奶混合制成濃縮懸浮液。

 4、使用無菌鑷子從安瓿管中取出濾紙條，并將其浸入細菌懸浮液中使其充滿，然后將其放回安瓿管中，并在其上放一個棉塞。  

 5、將安瓿瓶管放入含有五氧化二磷作為吸水劑的干燥器中，并使用真空泵將其抽干。  

 6、將棉布放入試管中并用火焰密封，中海生物技術（zhzbio.com）

 7、需要使用菌株?；謴团囵B時，在火焰上加熱安瓿的嘴，在被加熱的部分上滴一滴冷水以打破玻璃杯，然后用鑷子敲打玻璃杯。打開安瓿瓶后，將其取出。 

將濾紙放入中海液體培養基中，然后在培養箱中培養，細菌，酵母和絲狀真菌可以通過這種方式保存。前兩個可以保存大約兩年，有些絲狀真菌甚至可以保存十四至十七年。此方法比液氮和冷凍干燥方法簡單，不需要特殊設備。

三、菌種液體石蠟保藏儲存方法  

 1、將液體石蠟分配到錐形瓶中，用棉塞塞好并用牛皮紙包裹，然后用1.05kg / cm2，在121.3°C消毒加熱30分鐘，然后將其置于40°C的培養箱中以蒸發水蒸氣，然后放置。 

 2、在最合適的斜面培養基中培養需要保存的細菌。  

 3、使用無菌吸管吸取無菌液體石蠟，然后將其注入細菌生長的斜坡。該量應在斜坡頂部上方1厘米處，以使細菌與空氣隔離。  

 4、垂直放置試管，并將其存放在低溫或室溫下。在室溫下儲存的微生物壽命將比在冰箱中更長。  

此方法實用有效。霉菌，放線菌和孢子細菌可以保存兩年以上而不會死亡，酵母可以保存1-2年，一般非孢子細菌也可以保存壹年左右，即使是腦膜炎球菌也很難按常規方法保存，在37℃下也可以在培養箱中保存三個月。 

此方法的優點是生產簡單，無需專用設備且無需頻繁移植。缺點是在存儲過程中必須將其垂直放置，這會占用很大的空間并且不便于攜帶。從液體石蠟下面取下培養物并移植后，當接種環在火焰上燃燒時，中.海培養物很可能會與剩余的液體石蠟飛濺，因此應特別注意。 

四、菌種沙土保藏儲存方法  

 1、取河砂，加入10稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘以除去有機物。  

 2、倒出酸性水，用自來水沖洗至中性。  

 3、干燥并用40目篩子過篩，以除去粗顆粒并放在一旁。  

 4、從非耕作層中取出不含腐殖質的瘦黃土或紅色土壤，用自來水浸泡并清洗幾次，直到呈中性。  

 5、干燥粉碎后通過100目篩子進行篩分，以除去粗糙的顆粒。  

 6、根據黃土的比例與砂子的比例為三分之三或根據需要以其他比例混合，甚至可以將所有沙子或所有土壤均勻混合，放入10×100毫米的小試管或安瓿瓶試管中，每支試管中約裝1g，放在棉塞上，消毒并干燥。   

 7、取樣進行無菌檢查，每十根沙土管抽一次，將沙土倒入中海肉湯培養基，并在37°C孵育四十八小時。如果仍然存在細菌，則都需要重新消毒，然后可以使用無菌測試，它可以被使用直到被證明是無菌的。  

 8、成熟孢子層的選擇通常是指孢子層的完全生長，而營養細胞對該方法無效。好的菌株用無菌水洗滌以制備孢子懸浮液。  

 9、向每個沙質土壤管中加入約0.5ml孢子懸浮液，通常只是為了潤濕沙質土壤。 

 10、將其放在真空干燥器中，并使用真空泵排水。排水時間越短越好。確保在12小時內將其排干。  

 11、從10中取出一個，使用接種環取出一些沙粒，將其接種在傾斜的培養基上，然后培育成觀察生長情況以及是否有細菌生長。如果細菌存在或菌落數量很少或根本不長，則表明生產的沙子和土壤管道存在問題，需要進一步抽樣檢查。  

 12、如果檢查后沒有問題，請用火焰密封噴嘴并將其存放在冰箱或室內干燥的地方。 每六個月檢查一次活力和細菌狀況。  

 13、需要使用細菌?；謴团囵B物時，取少許沙子，將其轉移到中 海液體培養基中，然后放入培養箱中進行培養。  

此方法主要用于可產生孢子的微生物，例如霉菌和放線菌。因此，它是工業生產中使用最廣泛的抗生素，效果良好。它可以保存大約兩年，但是將其應用于植物細胞時無效。 

五、菌種冷凍干燥保藏儲存方法  

 1、準備安瓿瓶試管。用于冷凍干燥細菌保存的安瓿管應由中性玻璃制成。形狀可以是長頸和球形底部，也稱為淚滴型安瓿管。該尺寸需要6-7.5mm的外徑，105mm的長度和球形部分。直徑為9-11mm，壁厚為0.6-1.2mm。 也可以使用不帶球形部件的管狀安瓿瓶管。放入1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下滅菌30分鐘，然后放置。 

 2、準備菌株并冷凍干燥保存的菌株菌株，保存期可以達到幾年到十年以上。為了避免多年后出現錯誤，應特別注意所用菌株的純度，即應沒有雜菌。污染，然后在最佳溫度下的中海培養基中進行培養，從而可以培養出良好的培養物。 

細菌和酵母菌的年齡要求超過對數生長期。如果使用對數生長期的細菌進行保存，則它們的存活率將會降低。通常，細菌需要24-48小時的培養；酵母需要培養3天；應當將形成孢子的微生物保存為孢子；將放線菌和絲狀真菌培養7-10天。

 3、細菌懸液的制備和分配以細菌坡度為例，在傾斜管中加入約2ml脫脂牛奶制成濃縮細菌溶液，并向每個安瓿管中分配0.2ml。

 4、凍干機作為成套設備出售，價格昂貴。這里是可以達到相同目的的簡單方法和設備。將等分的安瓿瓶管放入低溫冰箱中并冷凍。沒有冷凍劑，如干冰固態CO2醇液或干冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿瓶管插入制冷劑中，冷凍4-5分鐘以凍結懸浮液。 

 5、真空干燥是在真空干燥過程中保持樣品冷凍。有必要準備一個冷凍罐，在其中放置碎碎的冰塊和鹽，混合均勻，并可以冷卻到-15°C。通常，如果真空在30分鐘內可以達到93.3Pa0.7mmHg，則干燥的物料將不會融化，然后繼續泵送空氣。在幾個小時內，肉眼可以看到干燥的材料已經變干，通常將真空泵抽至真空水平 26.7Pa0.2mmHg，保持壓力6-8小時。  

 6、抽真空密封并干燥后，取出安瓿瓶管并將其連接到用于密封的玻璃管。使用L形五通管繼續抽氣，它將在大約十分鐘內達到26.7Pa0.2mmHg。在真空狀態下，安瓿的頸部被薄薄的噴槍火焰密封。 密封后，在室溫下存放在冰箱或黑暗的地方。

六、菌種液氮冷凍保藏儲存方法  

 1、準備用于保存液氮的安瓿瓶試管。安瓿瓶管必須能夠承受溫度的突然變化而不會破裂。需使用硼硅酸鹽玻璃制造工藝生產的安瓿瓶，安瓿瓶的尺寸通常為75×10毫米，或者可以容納1.2毫米液體的安瓿瓶。  

 2、在添加保護劑并進行滅菌以存儲細菌時，酵母或霉菌孢子和其他易于分散的細胞，用1.05kg / cm2的棉塞塞住空的安瓿瓶管，并在121.3°C滅菌15分鐘：如果用于保存霉菌菌絲，需要在安瓿瓶管中加入保護劑，例如10蒸餾甘油或10％二甲基亞砜蒸餾水。添加量限于以后可以添加的菌落圓，然后在1.05kg / cm2和121.3℃滅菌十五分鐘。 

 3、用10％甘油蒸餾水溶液制成菌株，放入無菌安瓿瓶中。對于霉菌菌絲，使用無菌沖頭從平板上切下菌落。將其放入裝有保護劑的安瓿瓶中，然后用火焰密封。浸入水中以檢查是否泄漏。 

 4、然后將密封的安瓿瓶試管以每分鐘下降1°C的慢速冷凍至-30°C。 如果將細胞劇烈冷凍，則細胞內部會形成冰晶，從而降低存活率。 

 5、保存后，將安瓿瓶冷凍至-30°立即將C放入液氮冷凍機的小圓筒中，然后將小圓筒放入液氮保存器中。液氮存儲中的氣相溫度為-150°C，液氮為-196°C。 

 6、需要恢復培養液時并保存菌株，取出安瓿瓶管，立即將其置于38-40°C的水浴中以快速融化，直到所有融化。然后打開安瓿瓶管，將內容物轉移到合適的培養基中進行培養。  

此方法不僅適用于一般微生物的保存，還適用于某些難處理的中海微生物的保存。通過諸如支原體，衣原體，氫細菌等冷凍干燥方法進行保存，可以將難以形成孢子的霉菌，噬菌體和動物細胞保存很長時間，而不會改變其性質。缺點是需要特殊設備。  

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