中海生物技術關于質控菌種復蘇和存放常見的十五個問題，簡單做以下解答，希望對大家有所幫助：

問題①該菌種為第三代，假如在零下八十℃存放后取出活化，應屬哪一代？

解答：存放下來的是，第三代復活后，假如用盤子或者肉湯激活，相當于遷移了最初代，也就是第四代，假如還在瓷珠里，依然是原本的代數。假如保持在一個斜面上，這種斜面永遠是第三代，假如遷移到另一個斜面上，便是第四代。傳代培養/菌種活化/復蘇的原理，無論以全部形式繁殖一次，都是一代代傳下來的。然而，假如只有物理位置遷移而沒有復制，那就不是通過。

問題②當菌種傳代培養并存儲在瓷珠中時，我們必須選取一個菌體嗎？

解答：并不一定要挑單獨一個菌體，但一定要挑基本特征一致的菌體，也就是從同一個菌體中提純出來，保證它們的基本特征完全相同。原則是選取盡可能多，而不是少。

問題③菌種在零下七十度或是零下八十度低溫存放有具體實施標準規范嗎？

解答：有標準規范。《微生物菌種常規存放技術規范》是菌種保存的標準規范。你可以認真了解一下。全部的存放措施都有介紹，但瓷珠是一類相對比較新的存放措施，現階段都還沒收錄。GB4789.28至2013推薦長期性凍藏環境溫度不超過零下七十度。

問題④如何增加菌種的存放時長？

解答：很多科學試驗證實，該菌種在低溫/干燥/缺氧和缺乏營養的條件下存放效果最合適，越接近這一存放條件，該菌種的存放時長越長。比如甘油冷凍管，在零下八十攝氏度的存放時長比在零下二十攝氏度的存放時長要長。凍干菌粉可在零下二十攝氏度存放比二至八度環境時間長。

問題⑤怎樣純化菌種？

解答：純化是從可疑菌體平板中挑選單獨一個菌體，并在合適的非選擇性平板(TSA、NA)上劃線的操作過程。分離出來單獨一個菌體。

問題⑥我們是不是需要重新傳代培養，只存放最初代菌種？你覺得這是一個錯誤嗎？

解答：通常狀況下，是并不會問如此的問題的。最合適的存放措施應該是制備最初代菌種的甘油凍存管，放進超低溫冰箱中長期存放。第二代應變做為工作儲備應變，存放在斜面上。遷移后的第三代工作應變選用第二代工作儲備應變。

問題⑦為什么要用第三代做為工作菌種？

解答：歷經幾次傳代培養后，毒株的突變概率會大大增加，所以毒株的傳代培養需要控制在五代以內，而最初代毒株通常相對來說不穩定，需要傳到第三代才可以穩定毒株。所以在實際的工作中，中海生物通常選取第三代菌種做為工作菌種。

問題⑧質控品菌種傳五代以上是不是要銷毀？

解答：并不一定。歷經五代以上的傳代培養，只有品系變異的可能。然而，假如為第六代和第七代通行...是通過形態學/生化基本特征/DNA基本特征等來驗證的，并且性狀保持穩定，那么這些細菌在第五代之后仍然可以正常采用。

問題⑨菌種編碼目的？

解答：以金黃色葡萄球菌CMCCB26003為例。CMCC是中國醫學文化收藏中心的簡稱。其他常見的文化收藏包括ATCC美國標準文化收藏、CICC工業微生物文化收藏中心和FSCC食品安全文化收藏中心。B指細菌，F指真菌；2003年是CMCC的存放編碼。

問題⑩金黃色葡萄球菌ATCC6538和ATCC25923都有啥區別？

解答：這兩種皆來自（ATCC）美國標準培養物保藏中心的ATCC6538和ATCC25923菌種。不同的數字表明這兩個菌種的初始分離出來源不同。然而不同的編號的生化基本特性是不是一致，需要深入分析研究。在常常的生物學檢驗試驗中，發現金黃色葡萄球菌ATCC6538的溶血能力強于ATCC25923。

問題?用瓷珠存放管存放菌種。為什么要在加入菌液并搖勻后吸干菌液？

解答：瓷珠存放的原理是瓷珠是多孔的，細菌吸附在瓷珠上。假如去除液體，可以避免液體冷凍操作過程中產生的冰晶在反復凍融操作過程中破壞細菌，最終得以保護細菌。假如菌液不吸干，瓷珠的存放就達到不了反復凍融的效果。

問題?你們TSA斜面儲藏于多少度？你能把它放在冷庫里嗎？

解答：細菌的TSA斜面通常存放在二至八攝氏度，即冷凍冷藏。而弧菌/銅綠假單胞菌/嗜水氣單胞菌等對低溫敏感的菌種，在二十至二十五攝氏度的室內溫度下短時間存放，用甘油管或瓷珠長期性冷凍。

問題?液體培養基可以用以回收凍干菌種嗎？

解答：可以，但假如選用液體復蘇，只能夠觀察到混濁的中海培養基，不可以確定是不是有污染。推薦選用平板培養基復蘇凍干菌種，有利于促進簡單通過肉眼觀察菌體形態來鑒別回收菌種是不是被污染，初步鑒定菌種的純度。

問題?顯色培養基可以用于凍干菌種的回收嗎？

解答：不建議使用顯色培養基復活凍干菌種。凍干菌種是凍干的。在這個操作過程中會受到一定程度的破壞，復蘇需要一個最合適的生長環境，所以不可以選取復蘇培養基做為帶有抑菌成份且不利于菌種復蘇的選擇性培養基。顯色培養基應屬選擇性培養基。

問題?產氣莢膜梭菌冷凍時需要保持厭氧狀態嗎？

解答：并不需要。產氣莢膜梭狀芽孢桿菌應屬厭氧菌，但對厭氧程度要求不太嚴格要求，可以根據通常菌種冷凍法做好冷凍。如果是嚴格要求目的上的厭氧菌，需要特殊的冷凍措施。

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