無血清支原體培養(yǎng)基培養(yǎng)基檢驗

1. 質(zhì)控菌株 檢驗用質(zhì)控菌株為豬鼻支原體 BTS-7 株。將凍干種子恢復(fù)原量以 10%的

量接種無血清支原體液體培養(yǎng)基（使用前加入 10%血清），經(jīng) 35~37℃培養(yǎng)至變色，作為第

1 代；將第 1 代培養(yǎng)基物按 10%接種量接種無血清支原體液體培養(yǎng)基（使用前加入 10%血清），

35~37℃培養(yǎng) 12~72h，取活菌滴度≥108CCU/ml 培養(yǎng)物作為工作種子。在使用過程中凍干種

子傳代次數(shù)不超過 5 代，工作種子在-20℃以下保存有效期為 20 日。

2. 檢驗方法

2.1 靈敏度試驗

（1）培養(yǎng) 取工作種子液用待檢液體培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍系列稀釋至 10-10，另設(shè) 1 支未接

種液體培養(yǎng)基作為對照，置 35~37℃培養(yǎng) 5~7 日；取 10-6 稀釋度菌液 0.2ml 接種于固體培養(yǎng)

基平板 1 個，另設(shè) 1 個未接種固體培養(yǎng)基平板作為對照，置 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 5~7

日。同時各做 2 組重復(fù)。

（2）結(jié)果判定 以培養(yǎng)基呈現(xiàn)生長變色的最高稀釋度作為其靈敏度。如果 2 組培養(yǎng)基靈

敏度均≥10-8，對照不變色；固體培養(yǎng)基均有支原體菌落生長，對照無支原體菌落生長，判

培養(yǎng)基合格。若僅 1 組液體培養(yǎng)基靈敏度≥10-8，或 1 組固體培養(yǎng)基有支原體菌落生長，取

2 倍待檢品重檢。重檢后，如液體培養(yǎng)基靈敏度均≥10-8，固體培養(yǎng)基均有支原體菌落生長，

判為合格。否則，判為不合格。

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