羊布魯氏菌間接ELISA抗體檢測試劑盒使用操作說明書
日期:2022-04-26 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:1083 次
【作用與用途】
羊布魯氏菌抗體檢測試劑盒(GS.Brucellosis Antibody Test Kit)用于檢測羊血清中的羊布魯氏菌特異性抗體,用于羊的血清學診斷。
【檢測原理】
羊布魯氏菌抗體檢測試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板條微孔上預包被羊布魯氏菌抗原。在實驗中,加入稀釋后的待檢血清,經過溫育后,若樣品中含有羊布魯氏菌特異性抗體,則與酶標板上抗原結合。經洗滌后除去未結合的抗體和其他成分后,再加入酶結合物,與酶標板上的抗原抗體復合物發生特異性結合。再經洗滌除去未結合的酶結合物,在微孔板中加入TMB底物液,經酶催化形成藍色產物,加入終止液終止反應后,用酶標儀450 nm波長測定反應孔中的吸光度OD值。
【主要成分與含量】
抗原包被板 | 1板/2板 | 底物B液 | 12 mL |
陰性對照 | 2 mL | 終止液 | 12 mL |
陽性對照 | 2 mL | 10×濃縮洗滌液 | 75 mL |
酶結合物濃縮液 | 0.24 mL | 蓋板膜 | 1張/2張 |
酶結合物稀釋液 | 24 mL | 血清稀釋板 | 1塊/2塊 |
樣品稀釋液 | 60 mL | 說明書 | 1份 |
底物A液 | 12 mL |
【需自備的材料】微量移液器、量筒、酶標儀(450 nm)、去離子水、離心機(4000 rpm)、恒溫培養箱(25℃)、計時器等。
【用法與判定】
1、用法
1.1 試劑配制
洗滌工作液:使用前,濃縮的洗滌液應恢復至室溫(20~25℃),并搖動,使沉淀溶解(最好在37℃恒溫培養箱中加熱5~10 min),然后用蒸餾水作10倍稀釋(例如:75 mL的濃縮洗滌液加上675 mL蒸餾水)混勻,稀釋好的洗滌液2~8℃可存放7日。
1.2 樣本處理
① 取動物全血,待血液凝固后,4000 rpm離心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,無溶血。
② 在血清稀釋板中按1:50稀釋待檢血清樣品(如245 µL樣品稀釋液中加5 µL待檢血清樣品),充分混勻。
注:陰、陽性對照不用稀釋。
1.3 操作步驟
① 取抗原包被板(根據樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100 µL加至抗原包被板中。同時設陰性對照2孔、陽性對照2孔,取陰性、陽性對照各100 µL分別加入反應孔中,輕輕振勻孔中樣品,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)溫育30min。
② 棄去孔中的溶液,每孔加入稀釋好的洗滌液300 µL,靜置30 s后,棄去洗滌液。洗滌4次后在吸水紙上拍干。
③ 配制酶結合物工作液:按體積比1:100(1份酶結合物濃縮液+99份酶結合物稀釋液)混勻備用。
④ 每孔加酶結合物工作液100 µL,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)避光反應30 min。
⑤ 棄去孔中的溶液,洗滌4次,方法同②。
⑥ 將底物A液與底物B液按1:1混合,加入孔中,100 µL/孔,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)避光反應10 min。
⑦ 每孔加入終止液50 µL,5 min內測定結果。
2、判定
在酶標儀上讀各孔OD450nm值。
① 試驗成立的條件:
陰性對照平均OD450nm值<0.20且陽性對照平均OD450nm值≥1.0,試驗結果才有效;否則,應進行重復試驗。
② 計算方法:
S/P= |
樣品OD450nm值-陰性對照平均OD450nm值 |
陽性對照平均OD450nm值-陰性對照平均OD450nm值 |
③ 陰陽性判斷:
S/P<0.4時,判為陰性;S/P≥0.4時,判為陽性。
【注意事項】
1、羊布魯氏菌間接ELISA抗體檢測試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫。使用后放回2~8℃保存。
2、不同批號的試劑盒組份不得混用,不同試劑使用時應防止交叉污染。
3、底物液和終止液不能暴露于強光或接觸氧化劑。
4、待檢血清數量較多時,應先稀釋完所有待檢血清,再加到抗原包被板上,使反應時間一致。
5、稀釋10×濃縮洗滌液時,如發現有結晶,應加熱使其溶解后再使用。
6、移液時,應盡量準確,防止產生氣泡。
7、應嚴格遵守各操作步驟規定的時間和溫度。
【貯藏與有效期】2~8℃避光保存,有效期為12個月。
【規格】96孔/盒;192孔/盒
【生產企業】 北京中海生物科技有限公司
中海生物技術(棗莊)有限公司
網址:jyqhe.com
僅供獸醫診斷使用
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