支原體培養基使用說明書-中海生物
日期:2023-11-06 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:923 次
支原體培養基使用說明書
【產品名稱】
中文名稱:支原體培養基
英文名稱:Myoplasma Medium
漢語拼音:Zhiyuanti Peiyangji
【性 狀】 液體培養基為澄清,無雜質,玫瑰紅色液體;固體培養基為淡黃色固體,加熱融化后無絮狀物或沉淀;固體培養基輔助液恢復至室溫后為橙色液體。
【作用與用途】 用于非禽源性支原體檢驗。
【用法與判定】
1. 液體培養基 放在室溫半小時回溫,置于常溫水中輕輕搖動融化,待全部融化后分裝后使用。分裝量為:小瓶20ml/瓶,小管1.8ml/支。
2. 固體培養基 固體培養基和輔助液放在室溫半小時回溫。將固體培養基塑料蓋擰松一點,微波爐或水浴融化。微波爐融化時使用中火,每次1分鐘,待全部融化后使用。輔助液置于常溫水中輕輕搖動融化,待全部融化后使用。
當固體培養基溫度降到50℃左右時,,輔助液37℃預熱后緩慢貼壁加入,混合均勻后按平皿規格加入適量培養基(例如直徑60mm的平皿加入固體培養基9ml)制成固體平板。
3. 檢驗 取樣品5ml接種小瓶液體培養基,混勻后再從小瓶中取液體,分別移植到2支小管液體培養基(0.2ml/支)、2付固體平板(0.1~0.2ml/付),將小瓶與小管放37℃培養,固體培養基放置37℃、5%CO2培養箱中培養。接種后第5日、第10日、第15日從小瓶中取培養物移植2支小管液體培養基(0.2ml/支)和2付固體平板(0.1~0.2ml/付)。每日觀察培養物顏色有無變黃或變紫紅的現象,若無變化,在最后1次移植培養14日后停止觀察。在觀察期內,如小瓶或任何1支小管培養物顏色出現明顯變化(pH變化達±0.5)時,應立即移植于2支小管液體培養基和2付固體平板進行培養,觀察液體培養基是否出現恒定的pH變化以及固體培養基有無支原體菌落生長。
每次檢驗時,均應同時設立陰、陽性對照。陽性對照為接種1~10CFU/0.2ml質控菌液(豬鼻支原體BTS-7株)的小管液體培養基,和接種1~50CFU/0.2ml質控菌液的固體平板培養基;陰性對照為接種滅菌生理鹽水的小管液體培養基和固體平板培養基,同上法培養和觀察。
4. 結果判定
4.1 檢測結果有效性 當陽性對照液體培養基出現顏色變黃,固體平板上出現支原體菌落;陰性對照液體培養基不變色,固體平板上無支原體菌落時,檢驗有效,并作如下判定。
4.2 判定 若接種樣品的小瓶或小管培養基出現顏色變黃,且固體平板上可見支原體菌落,則判該樣品有支原體污染。
【注意事項】
1. 培養基自低溫環境取出,恢復到室溫后使用。液體培養基和輔助液常溫融化;固體培養基可微波爐或水浴加熱融化。
2. 制備固體平板時,固體培養基冷卻至50℃左右,,輔助液37℃預熱后緩慢貼壁加入,輕搖混勻,避免出現氣泡。
3. 進行培養基靈敏度檢驗時的器皿,必須達到細胞培養的要求。
4. 如液體培養基出現渾濁或顏色變化,固體培養基平板表面干裂,應停止使用。
【規 格】 支原體液體培養基80ml/瓶;支原體固體培養基60ml/瓶;支原體固體培養基輔助液13ml/瓶。
【貯藏與有效期】 支原體液體培養基-20℃以下保存,有效期為12個月;支原體固體培養基2~8℃保存,有效期為12個月;支原體固體培養基輔助液-20℃以下保存,有效期為12個月。
附:培養基檢驗
1. 質控菌株 檢驗用質控菌株為豬鼻支原體BTS-7株。將凍干種子恢復原量以10%的量接種支原體液體培養基,經35~37℃培養至變色,作為第1代;將第1代培養基物按10%接種量接種支原體液體培養基,35~37℃培養12~72h,取活菌滴度≥108CCU/ml培養物作為工作種子。在使用過程中凍干種子傳代次數不超過5代,工作種子在-20℃以下保存有效期為20日。
2. 檢驗方法
2.1 靈敏度試驗
(1)培養 取工作種子液用待檢液體培養基進行10倍系列稀釋至10-10,另設1支未接種液體培養基作為對照,置35~37℃培養5~7日;取10-6稀釋度菌液0.2ml接種于固體培養基平板1個,另設1個未接種固體培養基平板作為對照,置37℃、5%CO2培養箱中培養5~7日。同時各做2組重復。
(2)結果判定 以培養基呈現生長變色的最高稀釋度作為其靈敏度。如果2組培養基靈敏度均≥10-8,對照不變色;固體培養基均有支原體菌落生長,對照無支原體菌落生長,判培養基合格。若僅1組液體培養基靈敏度≥10-8,或1組固體培養基有支原體菌落生長,取2倍待檢品重檢。重檢后,如液體培養基靈敏度均≥10-8,固體培養基均有支原體菌落生長,判為合格。否則,判為不合格。
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