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    瓊脂培養基制備使用介紹及注意要點

    日期:2022-06-07 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:3273 次

    瓊脂(Agar)是一類從植物中提取的多糖,主要是源自于海藻植物。在微生物培養基中,瓊脂通常只用作凝固劑。液體培養基中瓊脂的用量通常為0.5~2g/L,使培養基擁有相應的粘性,避免液體對流。它經常使用于厭氧培養。半固體培養基瓊脂用量通常為3.5~4g/L,經常使用于菌種保藏、動態試驗等。植物組織培養基中瓊脂的用量通常為5~10g/L,固體培養基中瓊脂的用量通常為5~10g/L。通常瓊脂粉為白色、淺黃色或淺灰色粉末,不溶解于冷水。大多數瓊脂的熔點在90℃左右,冷卻后大多數瓊脂的冰點在40℃左右。反復加熱冷卻可以使瓊脂多次由液態變為固態,但瓊脂的凝膠強度會愈來愈低。

    一、瓊脂培養基制備使用

    ①依據瓊脂培養基的產品標簽,稱取適量培養基干粉,溶解于純凈水中,加熱煮沸至瓊脂完全溶解,分裝于試管或錐形瓶中;

    ②在規定的條件下對包裝好的培養基進行滅菌。加熱滅菌后的培養基可反復煮沸4~6次,一直到中海培養基完全溶解,然后倒入平板中待用;

    ③滅菌后,待培養基冷卻至50℃左右時,可放至47~50℃的水浴中保溫。水浴溫度可依據中海生物瓊脂培養基實際凝固溫度適當提高,存放時間通常不超過四個鐘頭;

    ④使用前,加入相應的添加劑成分,搖勻,倒入平板中,凝固后備用;或制成斜面,投入使用等。

    二、瓊脂培養基注意要點

    ①溶解干粉時,提議水溫在40℃以下,不超過60℃。瓊脂遇到熱水,表面容易吸水變硬,不利于分散和溶解。所以干粉溶解時,宜用冷水并不斷攪拌,一直到分散均勻無結塊,后再加熱。

    ②滅菌前,須要將瓊脂加熱煮沸,使其完全溶解分散均勻后,方能進行試管或錐形瓶分裝,不然分裝后瓊脂可能分布不均、凝結;

    ③滅菌前加熱煮沸溶解還有助于加快高壓滅菌過程中的熱量滲透,提高滅菌效果,降低滅菌失敗的概率。

    ④凝固的培養基不能重新高溫高壓滅菌。倘若中 海培養基中的成分穩定,可以在沸水浴中重新溶解以供一次使用。

    ⑤須要添加抗生素或其他不穩定成分的培養基應在使用前添加,當培養基冷卻至50~55℃時添加。過早或過燙加入這些成分,容易導致不穩定成分分解,降低培養基的使用效果;

    ⑥固化后的培養基不能反復加熱融化使用。反復加熱容易分解培養基中的營養物質,瓊脂的凝膠強度下降。通常允許成分穩定的培養基溶解一次使用。

    ⑦固化的培養基不宜儲存在冷凍條件下。中海培養基冷凍會破壞瓊脂的內部結構,造成瓊脂變性,水分流失或凝結不良。


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