通常情況下，各種類型的ELISA酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法需用（固相包被→添加待測(cè)樣品→溫育→清洗→添加酶標(biāo)物→溫育→清洗→添加底物→溫育→加終止液→比色→判定結(jié)論)這些操作順序步驟。中海生物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作流程較為復(fù)雜，操作流程不恰當(dāng)會(huì)產(chǎn)生很大的偏差。操作流程中應(yīng)特別注意這些五個(gè)注意事項(xiàng)要點(diǎn)。

要點(diǎn)⑴伴隨著疾病進(jìn)展或受別的方面影響，體內(nèi)某種抗體的含量變化很大，需用對(duì)樣品做好預(yù)備處理，如適度稀釋血清樣品或離心血脂。在間接法中，適度稀釋樣品也能夠降低非特異性反應(yīng)。

要點(diǎn)⑵液體進(jìn)料器通常用以添加樣品。在中海ELISA酶聯(lián)免疫測(cè)定中，海加樣有四次（加樣品/加酶結(jié)合物/加底物/加終止液）。添加樣品時(shí)，需要為每個(gè)樣品使用一個(gè)移液管噴嘴，以防止交叉污染。添加酶結(jié)合物及底物和終止液時(shí)不用替換吸嘴。

要點(diǎn)⑶在成批人工檢驗(yàn)檢測(cè)時(shí)，還應(yīng)特別注意操作流程時(shí)間誤差的影響。中'海樣品添加時(shí)長(zhǎng)和混合時(shí)長(zhǎng)的不同，促使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)的時(shí)長(zhǎng)不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法和定量檢測(cè)有很大影響。無意間的特別注意將會(huì)造成不正確的結(jié)論或不精準(zhǔn)的量化分析。

要點(diǎn)⑷洗滌是影響酶聯(lián)免疫吸附中海ELISA試驗(yàn)成功與失敗的重要環(huán)節(jié)。最終目的是除去未融合的免疫反應(yīng)物，停止抗原-抗體反應(yīng)，并除去與反應(yīng)無關(guān)的樣品。反應(yīng)過程中吸附在固體載體上的成分/游離酶標(biāo)記和非特異性物質(zhì)。洗板機(jī)可用以洗板或手工洗板。前面一種清洗品質(zhì)高，各反應(yīng)孔清洗結(jié)論勻稱，批次間差異性小。手工洗版要特別注意操控每個(gè)孔的洗版效果，差異性不適合過大。

要點(diǎn)⑸為了更好地精準(zhǔn)測(cè)定方法結(jié)論，中 海應(yīng)使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)讀數(shù)器和微孔板讀數(shù)器。酶標(biāo)儀可重復(fù)性能好。比色判讀可以選擇單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)。應(yīng)按照其反應(yīng)液的不同顏色選擇不同的波長(zhǎng)濾光片，反應(yīng)孔的吸光度值應(yīng)通過空白孔的零點(diǎn)校準(zhǔn)來確定好。

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