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    易于引起Pcr實(shí)驗(yàn)室污染四種關(guān)鍵因素概述

    日期:2022-05-17 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1271 次

    Pcr實(shí)驗(yàn)室最為普遍關(guān)鍵的污染因素,中海生物技術(shù)小編總結(jié)有下述四方面:

    因素①Pcr試劑污染

    關(guān)鍵因素是在配制Pcr試劑的過程中,樣品槍/容器/雙蒸水等溶液被Pcr核酸模板污染。

    因素②Pcr擴(kuò)增產(chǎn)物污染

    它是Pcr反應(yīng)中最重要并是最普遍的污染因素。畢竟Pcr產(chǎn)物的大拷貝量大概為1013拷貝/毫升,大大超過Pcr檢測幾個(gè)拷貝的極限,極少量的Pcr產(chǎn)物就能引起假陽性,產(chǎn)生假陽性。

    另一種易于被忽略且最有可能導(dǎo)致Pcr產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染。當(dāng)空氣摩擦液體表面時(shí),會(huì)產(chǎn)生浮質(zhì)。當(dāng)實(shí)際操作中劇烈搖動(dòng)反應(yīng)管時(shí),開啟蓋子,吸取樣品,用污染注射槍反復(fù)吸取樣品,會(huì)產(chǎn)生氣溶膠并被污染。據(jù)測算,一個(gè)氣溶膠粒子可以包含48,000個(gè)拷貝,所以它引起的污染是一個(gè)需要特別留意的問題。

    因素③標(biāo)本之間的交叉污染

    標(biāo)本的污染主要包含采集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本置放時(shí)因密封不嚴(yán)而溢出容器外,或容器外有標(biāo)準(zhǔn)本粘著,引起標(biāo)本之間的交叉污染;核酸模板提取過程中,加樣槍污染導(dǎo)致樣本間污染;部分微生物標(biāo)本,尤其是病毒,可以隨氣溶膠傳播或產(chǎn)生氣溶膠,引起相互污染。

    因素④克隆質(zhì)粒的污染

    此問題在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和部分克隆質(zhì)粒作為陽性對照的實(shí)驗(yàn)中也很普遍。由于單位體積克隆質(zhì)粒的含量相當(dāng)高,再加上純化過程需要更多的工具和試劑,活細(xì)胞中的質(zhì)粒因其生長繁殖的簡單性和活力,很可能被污染。


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