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    雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說明書

    日期:2022-05-19 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1857 次

    【名稱】 雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說明書

    本抗原系用雞新城疫病毒La Sota株接種SPF雞胚培養(yǎng),收獲尿囊液,經(jīng)離心后滅活制成。抗原的紅細(xì)胞凝集效價不低于1:256。用于檢測雞新城疫的抗體。

    【用法和判定】 

    1  抗原工作液制備

    1.1 抗原凝集價測定

    使用96孔板按表1進(jìn)行。用稀釋液將抗原倍比稀釋成不同倍數(shù),加入1%雞紅細(xì)胞懸液,再加入等量的稀釋液。將96孔微量板在振蕩器上搖勻,在20~30℃條件下放置20~40分鐘,當(dāng)紅細(xì)胞對照孔中的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。使紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋度,作為判定終點(diǎn)。

    雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說明書圖1

    1.2  抗原工作液配制及檢驗(yàn)

    1.2.1  4×HA抗原的配制:如抗原凝集價測定結(jié)果為1:256,4個血凝單位(即4×HA)=256/4=64(即1:64)。取31.5ml 稀釋液,加抗原0.5ml,使最終濃度為1:64。

    1.2.2  4×HA抗原的驗(yàn)證

    將配制的1:64倍稀釋的抗原液分別取0.5ml的量加入0.5ml 、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3.0ml的稀釋液中,使最終稀釋度為1:2、1:3、1:4、1:5、1:6和1:7。然后,從每一稀釋度取液體0.025ml,加入1%雞紅細(xì)胞懸液0.025ml,再加入0.025ml 稀釋液,混勻。將血凝板在室溫下放置20~40分鐘后,如配制的抗原液為4×HA,則1:4稀釋度將給出完全凝集終點(diǎn);如4×HA高于4個單位,可能1:5或1:6為終點(diǎn);如果較低,可能1:2或1:3為終點(diǎn)。應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果做適當(dāng)調(diào)整,使工作液確為4×HA。

    2  血凝抑制試驗(yàn)(HI)

    2.1  用稀釋液將被檢血清做2倍倍比稀釋,加入含4×HA的抗原液,并設(shè)陰、陽性血清對照,充分振蕩后,置20~30℃下作用30分鐘;再加入1%雞紅細(xì)胞懸液,在20~30℃下放置20~40分鐘,當(dāng)紅細(xì)胞對照孔中的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。使紅細(xì)胞凝集完全抑制的血清最高稀釋度作為判定終點(diǎn)。

    雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說明書圖2

    【注意事項(xiàng)】

    1.試驗(yàn)應(yīng)在20~30℃條件下進(jìn)行,每次檢測時應(yīng)設(shè)陽性、陰性血清(稀釋方法同被檢血清)及紅細(xì)胞對照。

    2.工作濃度的抗原應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,使用時抗原必須充分搖勻。

    3.應(yīng)將使用劑量的抗原無菌吸出,剩余抗原放回冰箱保存。

    4.只用于檢驗(yàn)雞血清,不能用于雞全血反應(yīng)。

    【規(guī)格】 抗原 2.0ml/瓶,20×稀釋液 30ml/瓶。

    【貯藏與有效期】 2~8℃保存,有效期為24個月。

    【生產(chǎn)企業(yè)】  北京中海生物科技有限公司

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