禽流感(H9 亞型)血凝抑制試驗抗原使用說明書
日期:2023-12-06 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:724 次
【獸藥名稱】
通用名稱:禽流感(H9 亞型)血凝抑制試驗抗原
商品名稱:無
英文名稱:Avian Influenza Virus(H9 subtype) Antigen for
Blood Hemagglutination Inhibition Test
漢 語 拼 音 : Qiuliugan(H9 yaxing)Xueningyizhishiyan
Kangyuan
【主要成分與含量】本抗原為滅活的禽流感(H9 亞型)病毒,
血凝效價≧1:128(即 2
7
)
【性狀】為疏松團塊。
【作用與用途】適用于血凝抑制試驗檢測禽流感(H9 亞型)病
毒抗體
【用法與判定】
1 材料
移液器及吸頭、1/15mol/L PBS(pH 值 7.0-7.2)、96 孔微量血
凝板(V 型)、1%(V/V)雞紅細胞懸液、加樣槽等。
2 試驗操作
2.1 血凝試驗(HA)
2.1.1 96 孔微量血凝板 1-12 孔加入 PBS0.025ml,取抗原 0.025ml
加入第 1 孔中,反復稀釋 5~10 次混勻,從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔,稀釋混勻取 0.025ml 加入第 3 孔,依此倍比稀釋至第 11 孔,
第 12 孔作為紅細胞對照孔。每孔補加 PBS0.025ml,再加入 1%(V/V)
雞紅細胞懸液 0.025ml,血凝板震蕩混勻,室溫放置 15~40 分鐘或
置 2~8℃40~60 分鐘。
2.1.2 結果判定 將血凝板傾斜 60 度,當對照孔中的紅細胞呈顯
著流淌的淚滴狀時判讀結果。以使紅細胞完全凝集的最高稀釋度作為
血凝價。
2.2 血凝抑制試驗(HI)
2.2.1 依據抗原 HA 血凝效價,配制 4 個血凝單位抗原(4HAU)。
舉例:血凝效價為 1:128,即 128/4=32(即稀釋倍數為 1:32)。取 PBS
9ml,加入抗原 1.0ml,(即成 1:10 稀釋)震蕩混勻取 1.0ml,加入
2.2mlPBS 中,使最終濃度為 1:32。對其血凝價進行回歸檢驗校準后,
2~8℃存放待用。
2.2.2 96 孔微量血凝板 1-11 孔加入 PBS0.025ml,第 12 孔加入
PBS0.05ml,取待檢血清 0.025ml 加入第 1 孔中,反復稀釋 5~10 次
混勻,從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔,稀釋混勻取 0.025ml 加入
第3孔,依此倍比稀釋至第10孔。取4HAU于1-11孔每孔加入0.025ml,
血凝板震蕩混勻,37℃作用 20 分鐘。再每孔加入 1%(V/V)雞紅細
胞懸液 0.025ml。第 11 孔為 4HAU 對照孔,第 12 孔為紅細胞對照孔。
將血凝板震蕩混勻,室溫放置 15~40 分鐘。
2.2.3 結果判定 將血凝板傾斜 60 度,若 4HAU 對照孔無紅細胞
凝集,紅細胞對照孔有紅細胞凝集,且呈明顯流淌的淚滴狀時,試驗成立,可判讀結果。使紅細胞凝集被完全抑制的血清最高稀釋度判為
被檢血清 HI 效價。
【注意事項】
1.倍比稀釋時,吸液、吐液動作不應過快,防止污染其他孔及
取量不準確。
2.4HAU 應現用現配,使用時充分混勻。
3.使用 1%雞紅細胞懸液時,應輕搖混勻。
4.因環境溫度不同,判定結果時,可依據對照孔情況,適當調
整作用時間。
5.設立陰、陽性血清對照,且當陰性對照血清 HI 效價≦1:4、
陽性對照血清 HI 效價與已知結果相比,誤差≤1 個稀釋度時,試驗
方可成立。
6.抗原使用前需用無菌生理鹽水復溶。
【規格】 2ml/瓶
【貯藏與有效期】 -15℃以下保存,有效期為 12 個月
【包裝】 10 瓶/盒
僅供獸醫診斷使用
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