瓊脂(Agar)有著特殊的熔點(diǎn)和凝固點(diǎn)，其成分無(wú)法被微生物分解利用，沒(méi)有抑制性成分。因而比較適合用以微生物培養(yǎng)基的配制，故此是固體培養(yǎng)基最經(jīng)常使用的凝固劑。迄今為止，當(dāng)今世界尚未有能完全取代瓊脂的替代物。

某些早期做植物組織培養(yǎng)或微生物培養(yǎng)的人，尤其是新手入門，在制備時(shí)常常會(huì)面臨培養(yǎng)基無(wú)法正常凝固的狀況:呈半流體或完全液態(tài)，與此同時(shí)會(huì)出現(xiàn)各種顏色。本篇文章中海生物技術(shù)將簡(jiǎn)單闡述瓊脂的凝固性及影響其凝固性的主要因素，并根據(jù)不一樣的操作步驟做一個(gè)敘述式的評(píng)述，以方便更多人在實(shí)際工作過(guò)程中徹底解決相應(yīng)問(wèn)題，事半功倍。

㈠瓊脂基礎(chǔ)知識(shí)

瓊脂(Agar)又稱果凍粉，因其最開(kāi)始是在日本藻類中提煉而被稱為洋菜。成品瓊脂為白色或淡黃色粉末或細(xì)條狀，具體由復(fù)雜的大分子多糖類組成。其水解產(chǎn)物由40%的D-半乳糖、3%硫酸鹽和2%丙酮酸組成。實(shí)際上是瓊脂糖和瓊脂糖的混合物。瓊脂膠是瓊脂糖的硫酸鹽，瓊脂糖具體借助氫鍵的引力構(gòu)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。因而，瓊脂糖凝膠的穩(wěn)定性好于哪些利用化學(xué)鍵交聯(lián)構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的瓊脂糖凝膠，其凝結(jié)劑的穩(wěn)定性差。

瓊脂(Agar)溶于熱水而不溶于冷水，因而在制備培養(yǎng)基時(shí)須要煮沸瓊脂。伴隨著溫度的升高，瓊脂逐漸溶解，當(dāng)溫度降至40℃時(shí)，開(kāi)始凝固。制備培養(yǎng)基時(shí)須要注意的是，考慮到各地生產(chǎn)的瓊脂質(zhì)量不一樣，同一濃度的瓊脂水溶液凝固后硬度/透明度/顏色均會(huì)有一定的不同。劣質(zhì)瓊脂不光凝固性差，而且含有許多其它雜物。

㈡瓊脂凝固性知識(shí)

做為培養(yǎng)基的凝固劑，瓊脂的凝固性不光與瓊脂本身的質(zhì)量相關(guān)，還受滅菌溫度/滅菌時(shí)間/瓊脂用量/pH值的影響。

①(0.7~0.8)%瓊脂水溶液冷卻后凝固良好。針對(duì)經(jīng)常使用的微生物培養(yǎng)基，瓊脂的用量趨向于基本穩(wěn)定，通常條形瓊脂的用量為2左右，粉狀瓊脂的用量為(1~1.5)%。

②培養(yǎng)基的pH值對(duì)瓊脂的凝聚影響很大，在正常濃度范圍內(nèi)是瓊脂能不能凝聚的主要因素。

③在4.302和120℃時(shí)影響不大。廷長(zhǎng)高溫高壓滅菌時(shí)間或反復(fù)高溫高壓處理不會(huì)影響其凝固性。當(dāng)pH為5.0-8.0較高時(shí)，瓊脂濃度是影響混凝度的具體原因。

④當(dāng)制備的固體培養(yǎng)基的pH值小于3.44時(shí)，其凝固將決定于滅菌溫度/溫度/滅菌時(shí)間/瓊脂量和pH值。當(dāng)中，滅菌溫度和時(shí)間與瓊脂凝固性呈負(fù)相關(guān)，瓊脂用量和pH值與瓊脂凝固性呈正相關(guān)。但在這些原因中，瓊脂的用量影響不大，因此在此類培養(yǎng)基的滅菌流程中，應(yīng)掌握好滅菌溫度、滅菌時(shí)間和pH值。選用較低的滅菌溫度、較短的滅菌時(shí)間和適當(dāng)提升培養(yǎng)基的pH值可以明顯提升瓊脂的凝固性。當(dāng)pH值小于或等于4.0較低時(shí)，pH值是影響固化等級(jí)的關(guān)鍵原因。

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