支原體培養(yǎng)基(固體|液體|輔助液)使用說明書附培養(yǎng)基檢驗(yàn)
日期:2022-02-22 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:3176 次
支原體培養(yǎng)基(固體|液體|輔助液)使用方法說明書
【產(chǎn)品名稱】
中文名稱:支原體培養(yǎng)基(http://jyqhe.com/product/jypyj-zytpyj.html)
英文名稱:Myoplasma Medium
漢語拼音:Zhiyuanti Peiyangji
【性 狀】 液體培養(yǎng)基為澄清,無雜質(zhì),玫瑰紅色液體;固體培養(yǎng)基為淡黃色固體,加熱融化后無絮狀物或沉淀;固體培養(yǎng)基輔助液恢復(fù)至室溫后為橙色液體。
【作用與用途】 用于非禽源性支原體檢驗(yàn)。
【用法與判定】
1. 液體培養(yǎng)基 放在室溫半小時(shí)回溫,置于常溫水中輕輕搖動(dòng)融化,待全部融化后分裝后使用。分裝量為:小瓶20ml/瓶,小管1.8ml/支。
2. 固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基和輔助液放在室溫半小時(shí)回溫。將固體培養(yǎng)基塑料蓋擰松一點(diǎn),微波爐或水浴融化。微波爐融化時(shí)使用中火,每次1分鐘,待全部融化后使用。輔助液置于常溫水中輕輕搖動(dòng)融化,待全部融化后使用。
當(dāng)固體培養(yǎng)基溫度降到50℃左右時(shí),,輔助液37℃預(yù)熱后緩慢貼壁加入,混合均勻后按平皿規(guī)格加入適量培養(yǎng)基(例如直徑60mm的平皿加入固體培養(yǎng)基9ml)制成固體平板。
3. 檢驗(yàn) 取樣品5ml接種小瓶液體培養(yǎng)基,混勻后再從小瓶中取液體,分別移植到2支小管液體培養(yǎng)基(0.2ml/支)、2付固體平板(0.1~0.2ml/付),將小瓶與小管放37℃培養(yǎng),固體培養(yǎng)基放置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種后第5日、第10日、第15日從小瓶中取培養(yǎng)物移植2支小管液體培養(yǎng)基(0.2ml/支)和2付固體平板(0.1~0.2ml/付)。每日觀察培養(yǎng)物顏色有無變黃或變紫紅的現(xiàn)象,若無變化,在最后1次移植培養(yǎng)14日后停止觀察。在觀察期內(nèi),如小瓶或任何1支小管培養(yǎng)物顏色出現(xiàn)明顯變化(pH變化達(dá)±0.5)時(shí),應(yīng)立即移植于2支小管液體培養(yǎng)基和2付固體平板進(jìn)行培養(yǎng),觀察液體培養(yǎng)基是否出現(xiàn)恒定的pH變化以及固體培養(yǎng)基有無支原體菌落生長。
每次檢驗(yàn)時(shí),均應(yīng)同時(shí)設(shè)立陰、陽性對照。陽性對照為接種1~10CFU/0.2ml質(zhì)控菌液(豬鼻支原體BTS-7株)的小管液體培養(yǎng)基,和接種1~50CFU/0.2ml質(zhì)控菌液的固體平板培養(yǎng)基;陰性對照為接種滅菌生理鹽水的小管液體培養(yǎng)基和固體平板培養(yǎng)基,同上法培養(yǎng)和觀察。
4. 結(jié)果判定
4.1 檢測結(jié)果有效性 當(dāng)陽性對照液體培養(yǎng)基出現(xiàn)顏色變黃,固體平板上出現(xiàn)支原體菌落;陰性對照液體培養(yǎng)基不變色,固體平板上無支原體菌落時(shí),檢驗(yàn)有效,并作如下判定。
4.2 判定 若接種樣品的小瓶或小管培養(yǎng)基出現(xiàn)顏色變黃,且固體平板上可見支原體菌落,則判該樣品有支原體污染。
【注意事項(xiàng)】
1. 中海支原體培養(yǎng)基自低溫環(huán)境取出,恢復(fù)到室溫后使用。液體培養(yǎng)基和輔助液常溫融化;固體培養(yǎng)基可微波爐或水浴加熱融化。
2. 制備固體平板時(shí),固體培養(yǎng)基冷卻至50℃左右,,輔助液37℃預(yù)熱后緩慢貼壁加入,輕搖混勻,避免出現(xiàn)氣泡。
3. 進(jìn)行培養(yǎng)基靈敏度檢驗(yàn)時(shí)的器皿,必須達(dá)到細(xì)胞培養(yǎng)的要求。
4. 如液體培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或顏色變化,固體培養(yǎng)基平板表面干裂,應(yīng)停止使用。
【規(guī) 格】 支原體液體培養(yǎng)基80ml/瓶;支原體固體培養(yǎng)基60ml/瓶;支原體固體培養(yǎng)基輔助液13ml/瓶。
【貯藏與有效期】 支原體液體培養(yǎng)基-20℃以下保存,有效期為12個(gè)月;支原體固體培養(yǎng)基2~8℃保存,有效期為12個(gè)月;支原體固體培養(yǎng)基輔助液-20℃以下保存,有效期為12個(gè)月。
【生產(chǎn)企業(yè)】 北京中海生物科技有限公司
中海生物技術(shù)(棗莊)有限公司
網(wǎng)址:jyqhe.com
僅供獸醫(yī)診斷使用
附:培養(yǎng)基檢驗(yàn)
1. 質(zhì)控菌株 檢驗(yàn)用質(zhì)控菌株為豬鼻支原體BTS-7株。將凍干種子恢復(fù)原量以10%的量接種支原體液體培養(yǎng)基,經(jīng)35~37℃培養(yǎng)至變色,作為第1代;將第1代培養(yǎng)基物按10%接種量接種支原體液體培養(yǎng)基,35~37℃培養(yǎng)12~72h,取活菌滴度≥108CCU/ml培養(yǎng)物作為工作種子。在使用過程中凍干種子傳代次數(shù)不超過5代,工作種子在-20℃以下保存有效期為20日。
2. 檢驗(yàn)方法
2.1 靈敏度試驗(yàn)
(1)培養(yǎng) 取工作種子液用待檢液體培養(yǎng)基進(jìn)行10倍系列稀釋至10-10,另設(shè)1支未接種液體培養(yǎng)基作為對照,置35~37℃培養(yǎng)5~7日;取10-6稀釋度菌液0.2ml接種于固體培養(yǎng)基平板1個(gè),另設(shè)1個(gè)未接種固體培養(yǎng)基平板作為對照,置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5~7日。同時(shí)各做2組重復(fù)。
(2)結(jié)果判定 以培養(yǎng)基呈現(xiàn)生長變色的最高稀釋度作為其靈敏度。如果2組培養(yǎng)基靈敏度均≥10-8,對照不變色;固體培養(yǎng)基均有支原體菌落生長,對照無支原體菌落生長,判培養(yǎng)基合格。若僅1組液體培養(yǎng)基靈敏度≥10-8,或1組固體培養(yǎng)基有支原體菌落生長,取2倍待檢品重檢。重檢后,如液體培養(yǎng)基靈敏度均≥10-8,固體培養(yǎng)基均有支原體菌落生長,判為合格。否則,判為不合格。
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